# 背景:
封闭肽是特异性结合靶抗体并阻断抗体结合的肽,这些肽通常含有抗体识别的表位,与封闭肽结合的抗体不再与靶蛋白上的表位结合。当某些抗体因为其非特异性结合而导致外周毒性时,封闭肽能够封闭抗体并在抗体到达肿瘤部位时利用酶切与抗体脱离,以暴露抗体的活性部分,杀伤肿瘤细胞。
# 流程:
对于封闭肽的筛选离不开对于随机多肽库的构建,ABLINK 利用 NNK 简并引物构建随机多肽文库,并允许构建线性肽和环肽文库,同时允许将多肽链接到噬菌体不同蛋白上(图 1)。
相对于常规筛选,封闭肽筛选的一大要求即使筛选拥有合适亲和力的封闭肽。亲和力过高的封闭肽与抗体永久结合难以脱离,而太弱的封闭肽易在抗体到达肿瘤前脱离。因此在对封闭肽的筛选的洗脱(elution)一步中利用不同浓度抗原洗涤抗体(图 2),富集的克隆在扩增后利用 ELISA/竞争性 ELISA 验证(图 3)去点马赛克,选取 IC50 值合适的多肽。